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如何應(yīng)對細(xì)胞復(fù)蘇不貼壁問題

凍存的細(xì)胞總是受損?復(fù)蘇的細(xì)胞存活率低?什么時候適合凍存細(xì)胞?復(fù)蘇細(xì)胞有什么要注意的?應(yīng)對細(xì)胞復(fù)蘇問題我們有妙招!

很多科研人會遇到細(xì)胞雖然是活細(xì)胞但是不貼壁的情況,這個情況其實很大可能就是凍存操作和復(fù)蘇操作的細(xì)節(jié)出了差錯。而要保證細(xì)胞凍存和復(fù)蘇不受傷害關(guān)鍵密寶是“慢凍快融”。

什么是“慢凍快融”

慢凍:這一步驟主要是為了防止細(xì)胞在冷凍過程中形成冰晶,從而對細(xì)胞造成損害。通過緩慢降低溫度,細(xì)胞可以逐步脫水,減少胞內(nèi)冰晶的形成,從而保護細(xì)胞結(jié)構(gòu)不受破壞。此外,加入低溫保護劑(如DMSO)也能提高胞膜對水的通透性,降低冰點,延緩凍結(jié)過程,進一步減少冰晶對細(xì)胞的損傷。

速融:在復(fù)蘇過程中,快速融化是必要的,以防止DMSO在液體狀態(tài)下對細(xì)胞的毒害作用??焖偃诨苁辜?xì)胞迅速進入復(fù)蘇和生長狀態(tài),避免由于緩慢融化導(dǎo)致的水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶,從而對細(xì)胞造成損傷。

凍存避坑指南

慢凍:這一步驟主要是為了防止細(xì)胞在冷凍過程中形成冰晶,從而對細(xì)胞造成損害。通過緩慢降低溫度,細(xì)胞可以逐步脫水,減少胞內(nèi)冰晶的形成,從而保護細(xì)胞結(jié)構(gòu)不受破壞。此外,加入低溫保護劑(如DMSO)也能提高胞膜對水的通透性,降低冰點,延緩凍結(jié)過程,進一步減少冰晶對細(xì)胞的損傷。

速融:在復(fù)蘇過程中,快速融化是必要的,以防止DMSO在液體狀態(tài)下對細(xì)胞的毒害作用??焖偃诨苁辜?xì)胞迅速進入復(fù)蘇和生長狀態(tài),避免由于緩慢融化導(dǎo)致的水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶,從而對細(xì)胞造成損傷。

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復(fù)蘇操作技巧

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復(fù)蘇后注意事項

細(xì)胞復(fù)蘇后只有非常少量細(xì)胞貼壁,是不是需要重新復(fù)蘇?先不要著急丟掉!可以補加血清和細(xì)胞因子,或者每隔 2-3 天換新鮮的生長培養(yǎng)基,經(jīng)過 2-3 次換液后,大部分細(xì)胞就能看到明顯增殖,此時再按照正常傳代操作即可。

細(xì)胞復(fù)蘇后剛開始已經(jīng)貼壁了狀態(tài)不錯,后面第二天開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象,這個情況可能是凍存前細(xì)胞消化過度,或者凍存中收凍存液殺害細(xì)胞凋亡導(dǎo)致的情況。




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