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                    關(guān)于A(yíng)549細胞,您不得不知道的一些操作

                    A549細胞來(lái)源

                    A549細胞又稱(chēng)為肺癌人類(lèi)肺泡基底上皮細胞,最早是在1972年由D.J.Giard等人通過(guò)一位58歲的白人男性的外植體腫瘤,轉移并培養肺腫瘤組織而得到的。

                           在自然界中,這些細胞是鱗狀的,它們可以通過(guò)肺泡擴散傳播一些物質(zhì),如水和電解質(zhì)。如果將A549細胞體外培養,它們會(huì )成長(cháng)為單層細胞,附著(zhù)或緊貼在培養瓶上。人肺泡上皮細胞株A549可以固定或懸掛在體外的溶液。

                    A549細胞培養體系

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                    A549細胞特點(diǎn)


                         部分細胞傳代后細胞內出現黑色小點(diǎn),細胞間隙內出現少量顆粒物或者培養基中浮游著(zhù)少量死細胞等均為正?,F象,對細胞的增殖及試驗無(wú)影響。

                    細胞消化或者復蘇操作不當容易導致細胞死亡裂解產(chǎn)生大量碎片及顆粒,進(jìn)而影響活細胞狀態(tài),注意消化或復蘇過(guò)程盡量輕柔,嚴格控制消化時(shí)間和復蘇操作規范,傳代或復蘇24h后建議觀(guān)察細胞,建議換液一次去除死亡細胞;

                     

                    A549細胞常見(jiàn)問(wèn)題處理

                    Q: 培養過(guò)程中出前黑點(diǎn)問(wèn)題如何處理?

                    A: 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光,這個(gè)屬于細胞自身特性,無(wú)法清除也無(wú)法改變,大部分細胞都會(huì )有這種現象,只是不同細胞顆粒多少有區別,細胞培養體系不適應、營(yíng)養缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內顆粒增加,建議使用合適的培養條件。

                    細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物,可以先吸走培養基后用PBS潤洗清除,再加新的培養基繼續培養。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞,消化完成后加完全培養基終止消化,混勻細胞,收集細胞懸液900-1000rpm(150g)離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細胞,再離心后,用完全培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗幾次。

                     

                    Q: A549細胞最佳消化時(shí)間建議多久

                    A: 每個(gè)客戶(hù)用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的,不能完全規定消化時(shí)間,以實(shí)際消化效果和客戶(hù)經(jīng)驗為準。

                     

                    Q:  A549 細胞倍增時(shí)間多久?

                    A: 該細胞倍增時(shí)間較短,生長(cháng)速度快,注意控制傳代密度,建議1:3-1:4。



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